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摘要:建立胡黃連中香草酸和桂皮酸的含量測定方法。方法用雙波長掃描法測定胡黃連中香草酸和桂皮酸的含量。結果香草酸。桂皮酸斑點基線構成之面積稱峰面積。A=×σ×h=2.507σh=1.064 Wh/2h>峰面積3Il內穩定,香草酸回收率為103.86%,RSD=1.33%,桂皮酸回收率為103.16%,RSD=1.28%。結論該方法穩定,可行。具有實用性。
關鍵詞:胡黃連;薄層掃描法;香草酸;桂皮酸
胡黃連具有保肝利膽、抗炎、抗真菌等藥理作用。胡黃連含胡黃連素、胡黃連苷(I II III)、D-甘露醇、香草酸、肉桂酸、胡黃連醇成分。香草酸和桂皮酸是其中的兩種抗菌成分。我們對胡黃連中香草酸、桂皮酸含量建立了薄層掃描法,以達到控制胡黃連的質量,從而為臨床療效提供保證。
1 儀器與試劑
藥材:胡黃連,太原市藥材公司;儀器:日本島津CS--9301PC薄層掃描儀;手提式熒光燈(上海固村電光儀器廠);對照品:香草酸對照品(中國藥品生物制品檢定所);桂皮酸對照品溶液(省藥檢所提供e=0.604mg/50ml);硅膠GF254(青島海洋化工廠)所用試劑均為分析純。
2 實驗條件
2.l 薄層層析條件:分別以石油醚-氯仿-丙酮-冰醋酸(10:4.4:10.1);正己烷-乙醚-冰醋酸(5:5:0.1);正己烷-氯仿-乙醚-冰醋酸(5:3:2:0.1)以及氯仿:甲醇(2:1)展開,多次比較發現正己烷。氯仿-乙醚-冰醋酸(5:3:2:0.4)分離效果好。
2.2 測定波長及主要掃描參數,分別對香草酸,桂皮酸對照品斑點在200nm-370nm掃描,在290nm處有zui大吸收,350nm處無吸收,固定350nm為參比波長,290nm為測定波長。
3 線性關系
3.1 精密稱取干燥至恒重的香草酸對照品適量,加甲醇制成lmg/ml的對照品溶液。精密吸取1、2、3,4、5μL點于同一塊薄層板上,展開測定,回歸方程為y=.039264+4.39133xl0-3x,r=0.9995,采用外標兩點法計算。
4 穩定性實驗
分別取供試品溶液20μL,對照品均為5μL,點于同一薄層板上,展開,每隔l小時測一次,連續測3小時,結果3小時內峰值基本不變。
香草酸X=969.375 RSD=0.24%
桂皮酸X=723.7l5 RSD=0.61%
5 回收率實驗
5.1 取供試品溶液5μL.點四點,分別加人香草酸對照品l、2、3、4μL。結果香草酸回收率為103.86%,RSD=1.28%。
52 取供試品溶液lμL,點四點,分別加入桂皮酸對照品3、5、lO、l5、20μL山結果桂皮酸回收率103.16%。RSD=1.28%。
搗碎藥粉加熱回流3小時(75%乙醇),過濾,回收乙醇,蒸干。殘渣用氫氧化鈉35ml溶解,轉移至分液漏斗中,乙醚脫色兩次,每次20ml,水層用稀鹽酸調節PH 2-3。然后用乙醚提取4次(3Omlx2+20mlx2),合并乙醚液,用無水硫酸鈉脫水,蒸干得殘渣。用甲醇溶解,定容至5Oml得供試品溶液。所得殘渣經70%乙醇浸未見與香草酸和桂皮酸對照品相應斑點。故說明藥物中香草酸與桂皮酸已提凈。
4.4A:GF254板,點樣。樣品取6 μL-標l。標2均為6μl。展開劑:正己烷-氯仿-乙醚-冰醋酸(5:3:2:0.4)。
B:GF254板,點樣。樣品取l5μL,標l,標2均為5μL。
6 討論
6.1 實驗首先作了單味胡黃連中香草酸和桂皮酸的含量測定。得香草酸0.5831%,桂皮酸0.4212%。(實驗采取索氏提取法提取9次,得到樣品液。
6.2 實驗過程中發現薄層板活化與否對實驗無影響。因為桂皮酸和香草酸都是酸性物質,本身極性很大。在硅膠板不活化的情況下展開劑的展開效果也很好。
6.3 水提與醇提的比較:在提取胡黃連有效成分時,我們采取了兩種溶劑提取,在實驗條件相同的情況下,發現水提取的成分含量低于醇提。
分析:水提取物太雜,不僅提取了有效成分,同時又有甙,蛋白質、鞣質等造成過濾和萃取有很大差異,損失了很大量。兩種溶液提取比較發現醇提易于水提,兩者所提成分配成50 nll樣品液。醇提顯黑黃色,水提顯亮黃色。
參考文獻
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